Journal d'ophtalmologie clinique et expérimentale
Libre accès

Abstrait

L'électrophorèse différentielle bidimensionnelle sur gel (2D-DIGE) révèle des protéines associées aux réseaux d'actine réticulés dans les cellules du réseau trabéculaire humain

Jaclyn Y. Bermudez, Hannah C. Webber, Gaurang C. Patel, Liang-Jun Yan, Abbot F. Clark et Weiming Mao

Contexte : Le principal facteur de risque du glaucome primitif à angle ouvert (GPAO) est l'augmentation de la pression intraoculaire (PIO). Chez les patients atteints de GPAO, la résistance à l'écoulement à travers le trabéculum (TM) est anormalement élevée. L'un des changements pathologiques importants associés au glaucome dans le TM est la formation excessive de réseaux d'actine réticulée (CLAN). Les CLAN sont des structures polygonales en forme de toile que l'on trouve dans les cellules et tissus confluents du TM du glaucome. Les facteurs associés au glaucome, le facteur de croissance transformant bêta 2 (TGFβ2) et les glucocorticoïdes induisent la formation de CLAN dans les cellules TM non glaucomateuses (NTM). Les CLAN peuvent augmenter la rigidité cellulaire et altérer l'homéostasie, contribuant ainsi à une PIO élevée.

Méthodes : Nous avons utilisé une approche protéomique pour identifier les protéines associées aux CLAN. Nous avons traité les cellules NTM primaires confluentes avec 0,1 % d'éthanol (EtOH ; véhicule), 100 nM de dexaméthasone (DEX) ou 5 ng/ml de TGFβ2 plus 0,1 % d'EtOH pendant 7 jours pour induire les CLAN. La fraction insoluble dans le Triton contenant le cytosquelette a été extraite pour une électrophorèse différentielle bidimensionnelle en gel (2D-DIGE). La spectrométrie de masse (MS) a été utilisée pour identifier les protéines différentiellement exprimées dans les gels 2D. La colocalisation des protéines identifiées avec les CLAN a été confirmée par microscopie à immunocytofluorescence (ICF).

Résultats : 2D-DIGE a révélé 103 protéines exprimées différemment dans les deux groupes de traitement. La MS a identifié 23 des protéines les plus enrichies. L'ICF a montré que la caldesmone, la calponine, la chaîne légère de la myosine et la tropomyosine étaient colocalisées avec les CLAN.

Conclusions : Nous avons identifié un sous-ensemble de protéines exprimées différemment dans les cellules NTM avec formation de CLAN induite par DEX ou TGFβ2. L'implication potentielle de ces protéines dans la formation et/ou le maintien de CLAN nécessite des recherches plus approfondies. Ces protéines pourraient apporter de nouvelles perspectives sur la pathogénèse du glaucome.