Mwambu Jane
Cette étude teste l'hypothèse selon laquelle l'invasion des kératinocytes partiellement transformés est initiée par des signaux pro-invasifs diffusibles fournis par des fibroblastes spécifiques à l'espèce. Des cultures organotypiques in vitro de muqueuse buccale humaine néoplasique ont été construites en faisant pousser une lignée cellulaire kératinocytaire non tumorigène partiellement transformée isolée d'une lésion buccale humaine dysplasique (DOKECACC94122104) sur divers types d'équivalents de tissu conjonctif. Les tissus cultivés ont été analysés par histomorphométrie (profondeur et zone d'invasion : Dinv, Ainv) et immunohistochimie. La présence de fibroblastes humains dans la matrice a induit une invasion locale de DOK (Dinv = 95,6 ± 7,1 μm, Ainv = 45,8 ± 3,5 %). Français Une invasion minimale (P < 0,05) a été observée lorsque DOK se développait sur une matrice de collagène simple (Dinv = 14,1 ± 2,1 μm, Ainv = 3,7 ± 0,8 %) ou sur des matrices contenant des fibroblastes de souris (Dinv = 11,5 ± 4,0 μm, Ainv = 4,3 ± 1,0 %) ou de rat (Dinv = 15,6 ± 1,2 μm, Ainv = 6,1 ± 0,5 %). Dans ces cultures, une invasion locale pouvait être induite par la présence de fibroblastes humains dans une couche inférieure de la matrice de collagène (P < 0,05) ou par un milieu conditionné provenant de cultures organotypiques de DOK sur une matrice contenant des fibroblastes humains (P < 0,05) mais pas par un milieu conditionné provenant de monocultures de fibroblastes humains (P > 0,05). Le dépôt de collagène IV humain a été observé à l'interface épithéliale-matrice uniquement lorsque le DOK se comportait de manière invasive. En conclusion, l'invasion de kératinocytes oraux partiellement transformés a été déclenchée par des facteurs diffusibles dérivés des fibroblastes induits par les kératinocytes d'une manière spécifique à l'espèce et associée à une synthèse de novo de collagène IV. Un nombre croissant de rapports suggèrent que les fibroblastes du stroma tumoral contribuent activement à la progression maligne des néoplasmes épithéliaux. Il a été démontré que les fibroblastes normaux et activés associés au carcinome améliorent in vitro le caractère invasif des lignées cellulaires de carcinome épidermoïde (SCC) humain. Plusieurs rapports d'expériences réalisées sur des cultures monocouches ont suggéré que cet effet pourrait être attribuable à des facteurs diffusibles synthétisés par les fibroblastes. Cependant, il a été suggéré récemment que les résultats des études réalisées sur des modèles de culture cellulaire monocouche bidimensionnels conventionnels sont difficiles à extrapoler à la situation in vivo car ils ne tiennent pas compte des mécanismes beaucoup plus complexes impliqués dans le processus tridimensionnel du développement du cancer et de son caractère invasif. Ainsi, d'autres preuves expérimentales provenant de modèles organotypiques in vitro plus complexes qui imitent étroitement la structure tissulaire tridimensionnelle in vivo et les interactions cellule à cellule sont nécessaires pour identifier le ou les facteurs spécifiques liés aux fibroblastes d'une importance majeure pour le caractère invasif in vivo des SCC. D'autre part, les études précédentes ont utilisé des lignées cellulaires entièrement transformées avec un phénotype invasif in vivo établi.On ne sait pas encore si le même mécanisme d'invasion dépendant des fibroblastes se produit aux premiers stades de la transformation des kératinocytes, lorsque l'invasion locale est initiée, et c'est pourquoi cette étude a été centrée sur ce sujet. Un autre facteur important lié aux fibroblastes pour l'invasion in vivo des cellules cancéreuses semble être l'origine des fibroblastes. Un rôle de la spécificité organique des fibroblastes dans la promotion de l'invasion des cellules cancéreuses a été démontré. Plusieurs études ont rapporté que seul un nombre limité de cellules tumorales d'origine humaine se développaient chez la souris nude. La sensibilité du test de malignité in vivo pour les cellules néoplasiques humaines, en particulier celles aux premiers stades de la malignité, a été remise en question, et des tentatives de développement de modèles expérimentaux in vivo fonctionnellement fiables de tissus humains chez la souris ont été réalisées en humanisant le microenvironnement de la souris par l'ajout de fibroblastes humains avant la xénotransplantation des cellules épithéliales humaines, mais la question de la spécificité de l'espèce n'a pas été étudiée plus en détail en partie à cause du manque de modèles expérimentaux appropriés. Le développement ultérieur de modèles organotypiques hétérologues a rendu possible de telles études par la construction de modèles hébergeant des types cellulaires de différentes espèces. Dans la présente étude, nous avons utilisé de tels modèles organotypiques 1) pour tester l'hypothèse selon laquelle l'invasion de cellules épithéliales orales partiellement transformées est déclenchée par des signaux pro-invasifs diffusibles fournis par des fibroblastes oraux spécifiques à l'espèce ; 2) pour étudier si les facteurs de croissance suggérés par les études de culture en monocouche comme étant importants pour l'invasivité du SCC jouent un rôle clé dans l'invasivité locale des kératinocytes oraux partiellement transformés dans des cultures organotypiques tridimensionnelles ; et 3) pour identifier les changements phénotypiques spécifiques des kératinocytes oraux partiellement transformés associés à la transition d'un comportement non invasif à un comportement invasif. Des kératinocytes buccaux humains partiellement transformés ont été obtenus auprès de la Collection européenne de cultures cellulaires et cultivés en routine dans un milieu Eagle modifié de Dulbecco supplémenté de 10 % de sérum de veau fœtal, de 20 μg/ml de l-glutamine et de 5 μg/ml d'hydrocortisone. Des fibroblastes buccaux humains normaux primaires ont été isolés à partir de six biopsies de muqueuse buccale humaine, après l'ablation chirurgicale des dents de sagesse comme décrit précédemment. L'étude, approuvée par le Comité d'éthique de l'Université de Bergen, n'a inclus que des donneurs cliniquement sains après consentement éclairé. La recherche a été réalisée au Département d'odontologie, de médecine oralePlusieurs études ont montré que seul un nombre limité de cellules tumorales d'origine humaine se développaient chez la souris nude. La sensibilité du test de malignité in vivo pour les cellules néoplasiques humaines, en particulier celles aux premiers stades de malignité, a été remise en question et des tentatives de développement de modèles expérimentaux in vivo fonctionnellement fiables de tissus humains chez la souris ont été réalisées en humanisant le microenvironnement de la souris par l'ajout de fibroblastes humains avant la xénotransplantation des cellules épithéliales humaines, mais la question de la spécificité de l'espèce n'a pas été étudiée plus en détail, en partie à cause du manque de modèles expérimentaux appropriés. Le développement ultérieur de modèles organotypiques hétérologues a rendu possible de telles études par la construction de modèles hébergeant des types de cellules de différentes espèces. Dans la présente étude, nous avons utilisé de tels modèles organotypiques 1) pour tester l'hypothèse selon laquelle l'invasion de cellules épithéliales orales partiellement transformées est déclenchée par un ou plusieurs signaux proinvasifs diffusibles fournis par des fibroblastes oraux spécifiques à l'espèce ; 2) d'étudier si les facteurs de croissance suggérés par les études de culture monocouche comme étant importants pour l'invasivité du SCC jouent un rôle clé dans l'invasivité locale des kératinocytes buccaux partiellement transformés dans des cultures tridimensionnelles organotypiques ; et 3) d'identifier les changements phénotypiques spécifiques des kératinocytes buccaux partiellement transformés associés à la transition d'un comportement non invasif à un comportement invasif. Les kératinocytes buccaux humains partiellement transformés ont été obtenus auprès de la Collection européenne de cultures cellulaires et cultivés en routine dans un milieu Eagle modifié par Dulbecco supplémenté de 10 % de sérum de veau fœtal, de 20 μg/ml de l-glutamine et de 5 μg/ml d'hydrocortisone. Des fibroblastes buccaux humains normaux primaires ont été isolés à partir de six biopsies de muqueuse buccale humaine, après l'ablation chirurgicale des dents de sagesse comme décrit précédemment. L'étude, approuvée par le Comité d'éthique de l'Université de Bergen, n'a inclus que des donneurs cliniquement sains après consentement éclairé. La recherche a été réalisée au Département d'odontologie, oralePlusieurs études ont montré que seul un nombre limité de cellules tumorales d'origine humaine se développaient chez la souris nude. La sensibilité du test de malignité in vivo pour les cellules néoplasiques humaines, en particulier celles aux premiers stades de malignité, a été remise en question et des tentatives de développement de modèles expérimentaux in vivo fonctionnellement fiables de tissus humains chez la souris ont été réalisées en humanisant le microenvironnement de la souris par l'ajout de fibroblastes humains avant la xénotransplantation des cellules épithéliales humaines, mais la question de la spécificité de l'espèce n'a pas été étudiée plus en détail, en partie à cause du manque de modèles expérimentaux appropriés. Le développement ultérieur de modèles organotypiques hétérologues a rendu possible de telles études par la construction de modèles hébergeant des types de cellules de différentes espèces. Dans la présente étude, nous avons utilisé de tels modèles organotypiques 1) pour tester l'hypothèse selon laquelle l'invasion de cellules épithéliales orales partiellement transformées est déclenchée par un ou plusieurs signaux proinvasifs diffusibles fournis par des fibroblastes oraux spécifiques à l'espèce ; 2) d'étudier si les facteurs de croissance suggérés par les études de culture monocouche comme étant importants pour l'invasivité du SCC jouent un rôle clé dans l'invasivité locale des kératinocytes buccaux partiellement transformés dans des cultures tridimensionnelles organotypiques ; et 3) d'identifier les changements phénotypiques spécifiques des kératinocytes buccaux partiellement transformés associés à la transition d'un comportement non invasif à un comportement invasif. Les kératinocytes buccaux humains partiellement transformés ont été obtenus auprès de la Collection européenne de cultures cellulaires et cultivés en routine dans un milieu Eagle modifié par Dulbecco supplémenté de 10 % de sérum de veau fœtal, de 20 μg/ml de l-glutamine et de 5 μg/ml d'hydrocortisone. Des fibroblastes buccaux humains normaux primaires ont été isolés à partir de six biopsies de muqueuse buccale humaine, après l'ablation chirurgicale des dents de sagesse comme décrit précédemment. L'étude, approuvée par le Comité d'éthique de l'Université de Bergen, n'a inclus que des donneurs cliniquement sains après consentement éclairé. La recherche a été réalisée au Département d'odontologie, de médecine oraleFrançais Dans la présente étude, nous avons utilisé de tels modèles organotypiques 1) pour tester l'hypothèse selon laquelle l'invasion des cellules épithéliales orales partiellement transformées est déclenchée par des signaux diffusibles et pro-invasifs fournis par des fibroblastes oraux spécifiques à l'espèce ; 2) pour étudier si les facteurs de croissance suggérés par les études de culture en monocouche comme étant importants pour l'invasivité du SCC jouent un rôle clé dans l'invasivité locale des kératinocytes oraux partiellement transformés dans des cultures tridimensionnelles organotypiques ; et 3) pour identifier les changements phénotypiques spécifiques des kératinocytes oraux partiellement transformés associés à la transition d'un comportement non invasif à un comportement invasif. Les kératinocytes oraux humains partiellement transformés ont été obtenus auprès de la Collection européenne de cultures cellulaires et cultivés en routine dans du milieu Eagle modifié de Dulbecco supplémenté de 10 % de sérum de veau fœtal, de 20 μg/ml de l-glutamine et de 5 μg/ml d'hydrocortisone. Des fibroblastes buccaux humains normaux primaires ont été isolés à partir de six biopsies de muqueuse buccale humaine, après l'ablation chirurgicale des dents de sagesse comme décrit précédemment. L'étude, approuvée par le Comité d'éthique de l'Université de Bergen, n'a inclus que des donneurs cliniquement sains après consentement éclairé. La recherche a été réalisée au Département d'odontologie, de dentisterie oraleFrançais Dans la présente étude, nous avons utilisé de tels modèles organotypiques 1) pour tester l'hypothèse selon laquelle l'invasion des cellules épithéliales orales partiellement transformées est déclenchée par des signaux diffusibles et pro-invasifs fournis par des fibroblastes oraux spécifiques à l'espèce ; 2) pour étudier si les facteurs de croissance suggérés par les études de culture en monocouche comme étant importants pour l'invasivité du SCC jouent un rôle clé dans l'invasivité locale des kératinocytes oraux partiellement transformés dans des cultures tridimensionnelles organotypiques ; et 3) pour identifier les changements phénotypiques spécifiques des kératinocytes oraux partiellement transformés associés à la transition d'un comportement non invasif à un comportement invasif. Les kératinocytes oraux humains partiellement transformés ont été obtenus auprès de la Collection européenne de cultures cellulaires et cultivés en routine dans du milieu Eagle modifié de Dulbecco supplémenté de 10 % de sérum de veau fœtal, de 20 μg/ml de l-glutamine et de 5 μg/ml d'hydrocortisone. Des fibroblastes buccaux humains normaux primaires ont été isolés à partir de six biopsies de muqueuse buccale humaine, après l'ablation chirurgicale des dents de sagesse comme décrit précédemment. L'étude, approuvée par le Comité d'éthique de l'Université de Bergen, n'a inclus que des donneurs cliniquement sains après consentement éclairé. La recherche a été réalisée au Département d'odontologie, de dentisterie orale