Journal de la science cellulaire et de la thérapie
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Abstrait

Protéine de fusion TATκ d'OCT-3/4 et KLF-4 : lignées cellulaires mixtes stables capables de délivrer des protéines de fusion aux cellules cibles

Fazlina Nordin, Gee Jun Tye, Joop Gaken et Farzin Farzaneh

Un nombre croissant de preuves a montré que l'expression forcée d'un petit panel de gènes, dont Oct-3/4, KLF4, Sox2 et c-Myc, peut induire la reprogrammation de cellules précédemment différenciées, pour générer des cellules souches pluripotentes induites (iPSC). Cependant, la génération d'iPSC par des modifications génétiques augmente le risque de transformation maligne. Par conséquent, une reprogrammation in vitro efficace de cellules différenciées, sans modification génétique irréversible, est hautement souhaitable. Le trans-activateur amélioré de la transcription kappa (TATκ), un TAT-VIH synthétique, confère la capacité de délivrer plusieurs protéines dans les cellules cibles, ce qui en fait un mécanisme de délivrance alternatif potentiel pour les facteurs de transcription ou les agents thérapeutiques. En utilisant la protéine de fluorescence verte (GFP) et l'apoptine comme protéines modèles, nous avons récemment décrit une stratégie pour générer des lignées cellulaires qui sécrètent des protéines portant un domaine de transduction protéique HIV-TAT modifié (PTD) pour une absorption ultérieure médiée par la transduction protéique par les cellules cibles. En utilisant cette stratégie, nous avons généré des cellules 293T sécrétant les facteurs pluripotents Oct-3/4 ou KLF4 en fusion avec TATκ. Oct-3/4 et KLF4 ont été détectés dans le milieu de culture de la cellule 293T transduite et l'absorption d'Oct-3/4 par les lignées de cellules hématopoïétiques JURKAT et FDCP-1 a été confirmée par analyse Western blot. KLF4 était présent dans le milieu de culture de la cellule 293T productrice mais nous ne sommes toujours pas en mesure de démontrer l'absorption par les cellules cibles. Sur la base des résultats obtenus, nous espérons que ces lignées cellulaires à population mixte stable pourront jouer un rôle important dans la génération d'iPSC à des fins thérapeutiques.