Journal d'ophtalmologie clinique et expérimentale
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Abstrait

Normalisation de l'isolement des cellules endothéliales cornéennes humaines et utilisation de la membrane amniotique humaine dénudée comme support pour les cellules endothéliales cornéennes humaines

Kalpana Suresh, Alan Mathew Punnoose, Sarah Kuruvilla et Tanvi Khanna

Objectifs : Standardiser l'isolement des cellules endothéliales cornéennes humaines (HCEC) et utiliser la membrane amniotique humaine dénudée (HAM) comme support pour les HCEC isolées.
Méthodes : La membrane amniotique humaine a été dénudée à l'aide de 1,2 unités/ml de Dispase II à 37°C pendant 60 minutes, puis grattée mécaniquement. Les feuillets de membrane endothéliale cornéenne et de Descemet ont été décollés des yeux cadavériques de donneurs humains impropres à une utilisation chirurgicale et digérés enzymatiquement avec 2 mg/ml de solution de collagénase II à 37°C et 5 % de CO2 pendant 2 heures. Les cellules isolées ont été remises en suspension dans du milieu de culture avec des suppléments et étalées sur des récipients de culture non revêtus pendant quatre heures pour éliminer les fibroblastes qui adhèrent plus rapidement que les cellules endothéliales. Après pré-étalement, les cellules non adhérentes ont été ensemencées sur des boîtes recouvertes de gélatine ou sur une membrane amniotique dénudée dans un milieu OptiMEM supplémenté de facteurs de croissance. Les cellules ont été analysées au microscope pour l'adhérence et la morphologie polygonale.
Résultats : La microscopie de la membrane amniotique dénudée n'a montré aucun reste de cellules épithéliales. La digestion enzymatique de la cornée a laissé derrière elle des feuillets de Descemet acellulaires avec les cellules endothéliales flottant individuellement ou en amas avec pré-placage aidant à un isolement de cellules endothéliales plus exemptes de fibroblastes. Peu de cellules isolées ont réussi à s'échafauder sur la membrane amniotique et à conserver cette adhérence lors des remplacements de milieu ultérieurs.
Conclusion : Le traitement prolongé de la HAM à l'aide de l'enzyme douce Dispase-II entraîne la dénudation de la membrane, qui sert d'échafaudage efficace pour les cellules endothéliales cornéennes récoltées. Cette approche peut être explorée plus avant comme une alternative rentable pour la prolifération des cellules endothéliales et comme un modèle in vitro pour les études d'ingénierie tissulaire cornéenne.