Journal d'immunologie clinique et cellulaire
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Abstrait

Expression stable et caractérisation d'un récepteur optimisé de mannose

David J Vigerust, Sherell Vick et Virginia L Shepherd

Le récepteur du mannose (MR) est un récepteur de surface des macrophages qui reconnaît les modèles moléculaires associés aux pathogènes (PAMP) d'un large éventail de pathogènes bactériens, fongiques et viraux. Les études fonctionnelles du MR sont entravées par la rareté des lignées cellulaires humaines qui expriment le récepteur. Les systèmes modèles actuels disponibles pour l'étude de la biologie du MR présentent souvent de faibles niveaux d'expression et ne conservent pas bon nombre des propriétés classiques du MR. Bien que plusieurs laboratoires aient signalé une expression transitoire et stable du MR à partir de plasmides, les données préliminaires de notre laboratoire suggèrent que ces plasmides produisent une protéine dépourvue de domaines critiques et souvent instable dans le temps. Dans ce rapport actuel, nous décrivons la génération et la caractérisation d'un nouveau système optimisé par codon humain pour l'expression transitoire et stable du MR. Des codons et des séquences rares qui contribuent à l'instabilité de l'ARNm ont été modifiés pour produire un ARNm amélioré qualitativement et quantitativement. L'imagerie confocale du récepteur optimisé exprimé de manière transitoire et stable démontre une distribution cohérente avec les rapports précédents. Pour démontrer les caractéristiques fonctionnelles du récepteur optimisé, nous montrons en outre que l'introduction d'un plasmide MR optimisé par codon peut conférer une phagocytose associée au MR de S. aureus à des cellules HeLa non phagocytaires. Nous montrons que trois molécules participent à l'engagement et à l'internalisation de S. aureus . Il a été constaté que le MR se colocalisait avec le récepteur de type Toll 2 (TLR2) et Rab5 après exposition à S. aureus coloré au pHrodo , suggérant une coopération entre les trois molécules pour engager et internaliser la particule bactérienne. Cette étude décrit un récepteur MR optimisé capable de transfection avec des caractéristiques fonctionnelles similaires au récepteur de type sauvage et démontre en outre un nouveau système pour l'étude continue de la biologie et de la fonction du MR