Journal des techniques de chromatographie et de séparation
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Abstrait

Séparation et analyse des nucléotides mono-di- et tri-phosphates à partir d'extraits cellulaires par HPLC en phase inverse

Praveen Kusumanchi, Rachel Rogers, Ting Zhang, Suthat Liangpunsakul, Zhihong Yang, Hiremagalur N Jayaram

L'objectif de la présente étude était de développer une chromatographie liquide haute performance en phase inversée à paires d'ions simple, fiable et très sensible pour la séparation et la quantification des nucléotides puriques, pyrimidiques et pyridiniques. Tout d'abord, nous avons optimisé les conditions de la colonne pour obtenir une séparation et une quantification de base de 15 nucléotides. La quantité minimale requise pour détecter tous les ribonucléotides avec reproductibilité et haute précision était de 10 pmol. Les courbes d'étalonnage pour tous les standards de nucléotides étaient linéaires dans la plage de 10 à 200 pmol. Cette méthode peut être utilisée avec succès pour quantifier tous les nucléotides simultanément dans des études avec des inhibiteurs de nucléotides tels que la tiazofurine et le benzamide riboside dans des lignées cellulaires cancéreuses. Il s'agit du premier rapport montrant la séparation des 15 nucléotides en une seule injection