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Abstrait

Criblage des mutations/SNP par analyse spectrophotométrique de la courbe de fusion : une étude préliminaire sur la méthode de détection des mutations non électrophorétique et sans colorant

Arif Ahmad*, Mohammad Shahid, Mohammad Raish et Syed Akhtar Husain

Les méthodes actuellement disponibles pour le dépistage des mutations nécessitent une sonde/un colorant marqué par fluorescence ou une électrophorèse ou les deux, ce qui rend ces méthodes fastidieuses, coûteuses et chronophages. Nous avons décrit ici une méthode de dépistage des mutations/SNP sans avoir besoin de sonde/colorant et d'électrophorèse. La technique ne nécessite que le produit PCR et un spectrophotomètre à effet Peltier. Nous avons examiné les mutations en surveillant le profil de fusion de l'ADN et la température de transition des homoduplex et des hétéroduplex en enregistrant l'absorption des UV par duplex de fusion. L'absorption de chaque duplex a été mesurée à 260 nm de 60 °C à 85 °C par incrément de température de 1 °C en utilisant un spectrophotomètre à effet Peltier avec une vitesse de chauffage de 1 °C/min. Dans les échantillons hétéroduplex, il y a une augmentation rapide de l'absorption des UV à des températures de transition de 70 °C. Alors que dans l'échantillon homoduplex, elle est atteinte après 75 °C. La mutation dans l'échantillon a été détectée en observant la diminution de la température de transition des échantillons hétéroduplex par rapport à l'homoduplex.