Ingénierie enzymatique
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Abstrait

Réutilisation de la cyclodextrine glycosyltransférase par immobilisation sur des supports magnétiques

Kate Cristina Blanco, Francisco José dos Santos, Natalia Sozza Bernardi, Miguel Jafelicci Júnior, Rubens Monti et Jonas Contiero

La CGTase de Bacillus lehensis isolée des eaux usées d'une minoterie de manioc dans l'État de São Paulo, au Brésil, a été immobilisée après avoir été partiellement purifiée par précipitation au sulfate d'ammonium. La CGTase partiellement purifiée a été immobilisée par liaison covalente sur un support de magnétite, qui a été silanisé avec du 3-aminopropyltriméthoxysilane et activé avec du glutaraldéhyde, ce qui a donné un rendement de 16,27 % et une activité finale de 17,54 % de l'activité initiale. Les propriétés physicochimiques et la cinétique de la cyclodextrine glycosyltransférase de Bacillus lehensis ont été déterminées. La température optimale de la CGTase immobilisée était supérieure à celle de l'enzyme soluble (70°C et 55°C, respectivement). Le pH optimal de l'enzyme immobilisée était le même que celui de l'enzyme soluble (pH 8,0). Français Dans les essais de pH et de thermostabilité, 50 % de l'activité enzymatique a été maintenue après 24 h et 26,22 % de l'activité initiale a été conservée après 160 min, respectivement. La constante de Michaelis-Menten était de 0,82 mg.ml-1 et la vitesse maximale était de 45,45 mol.ml−1.min−1. Dans l'étude de réutilisation de l'enzyme immobilisée après quatre cycles, 16,66 % de l'activité catalytique initiale a été maintenue, démontrant la capacité de récupérer et de réutiliser l'enzyme immobilisée sur la magnétite.