Techniques avancées en biologie et médecine
Libre accès

Abstrait

Restauration de l'expression des gènes mitochondriaux à l'aide d'un gène humain cloné dans une cellule pulmonaire mutante de hamster chinois

Zaki A Sherif et Carolyn W Broome

Contexte : Gal-32 est un mutant nucléaire de cellules pulmonaires de hamster chinois qui est incapable de se développer dans le galactose en raison d'un défaut de synthèse des protéines mitochondriales. Le produit du gène Gal-32 étant inconnu, il était impératif d'utiliser la complémentation phénotypique pour cloner un gène humain qui corrigeait la mutation Gal-32.

Résultats : Des cellules récessives Gal-32 ont été co-transformées avec l'ADN plasmidique pSV2-neo et l'ADN recombinant d'une bibliothèque génomique humaine contenant le gène dominant Gal+ humain et un gène de résistance au chloramphénicol (camr) présent dans le vecteur pSV13. Les transformants primaires ont été sélectionnés par croissance dans le galactose et l'analogue de néomycine G418. Afin de récupérer le gène humain Gal+, une bibliothèque génomique a été construite avec l'ADN du transformant primaire et le vecteur cosmide pCV108. Le gène camr a été utilisé pour identifier les clones avec les séquences humaines proches. L'ADN de deux clones camr hybridant Alu a pu transformer les cellules récessives Gal-32 en phénotype Gal+ et restaurer la synthèse des protéines mitochondriales.

Conclusion : Ces données démontrent l’isolement de deux clones recombinants transformants pCV108 contenant un gène humain qui complète la mutation Gal-32 du hamster chinois et restaure le métabolisme du galactose.