Journal d'immunologie clinique et cellulaire
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Abstrait

Analyse quantitative de la protéine de choc thermique liposomale 70 (Hsp70) dans le sang des patients atteints de tumeurs à l'aide d'un nouveau test ELISA LipHsp70

Stephanie Breuninger, Janina Erl, Clemens Knape, Sophie Gunther, Ivonne Regel, Franz Rödel, Udo S Gaipl, Jun Thorsteinsdottir, Lydia Giannitrapani, Anne M Dickinson et Gabriele Multhoff

Des niveaux élevés de la protéine de choc thermique inductible par le stress 70 (Hsp70) dans la circulation périphérique ont été signalés pour de nombreuses entités tumorales. Conformément à ces résultats, nous avons montré que les cellules tumorales à membrane positive Hsp70 libèrent activement Hsp70 dans des vésicules lipidiques de type exosome. Étant donné que la plupart des tests ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assays) Hsp70 commerciaux ne sont pas validés pour la détection de Hsp70 liposomale dans le sérum, le test ELISA lipHsp70 a été établi en utilisant l'anticorps monoclonal cmHsp70.1 comme réactif de détection. Il a été rapporté que cet anticorps reconnaît la Hsp70 libre et liée à la membrane sur des cellules tumorales vivantes.
La validation de l'ELISA a montré une précision et une linéarité élevées du test dans une plage de concentrations de 0,36 à 17,4 ng/ml. Une comparaison de la récupération de Hsp70 enrichie dans des échantillons tamponnés et sériques a révélé une récupération significativement meilleure en utilisant le test ELISA lipHsp70 par rapport à un test ELISA commercial. Français En ce qui concerne la Hsp70 associée aux lipides, une récupération dix fois plus élevée a été constatée avec le test ELISA lipHsp70 par rapport au test ELISA commercial. L'analyse d'échantillons sanguins de volontaires humains sains (n=114) a révélé une concentration sérique moyenne de Hsp70 de 6,4 ± 2,7 et 2,8 ± 1,3 ng/ml, respectivement, en utilisant le test ELISA lipHsp70 et le test ELISA de contrôle. Aucune différence significative liée à l'âge dans les taux sériques de Hsp70 n'a été détectée. Le test ELISA lipHsp70 convient aussi bien au sérum qu'au plasma et les concentrations de Hsp70 mesurées n'ont pas été affectées par la prise alimentaire, la congélation et la décongélation répétées de l'échantillon ou une hémolyse modérée. Une comparaison des taux de Hsp70 chez des patients atteints d'un cancer de la tête et du cou, du poumon, colorectal, du pancréas, d'un glioblastome ou d'hémopathies malignes et chez des volontaires humains sains a révélé des taux significativement plus élevés chez les patients atteints de tumeurs.
En résumé, le test ELISA lipHsp70 fournit une méthode hautement sensible et robuste pour mesurer la Hsp70 liposomale et libre dans le sérum et le plasma et pourrait ainsi fournir un outil utile pour la détection des tumeurs et pour surveiller l'issue clinique des patients.