Journal des techniques de chromatographie et de séparation
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Abstrait

Purification et caractérisation de la glutathion-S-transférase du foie de rat : effet du tétrachlorure de carbone et du lait de chamelle

Mohamed Lebda, Nabil Taha, Saad Noeman, Mahdy Korshom, Abd El-Wahab Mandour et Ahlam El-Leboudy

Les glutathion-S-transférases (GST) constituent une famille multifonctionnelle d'enzymes de biotransformation dimériques et principalement cytosoliques qui jouent un rôle important dans la protection des tissus contre le stress oxydatif. Elles catalysent la conjugaison du glutathion intracellulaire avec une grande variété de produits chimiques possédant un centre électrophile et les conjugués GSH finaux ont une hydrophilie accrue qui facilite leur métabolisme et leur élimination ultérieurs. Notre étude a été menée pour purifier l'enzyme GST du foie de rat en utilisant une chromatographie d'affinité en une étape et étudier l'effet inhibiteur du tétrachlorure de carbone et l'effet améliorant de l'administration de lait de chamelle. La purification de l'enzyme GST a révélé que la concentration en protéines diminuait dans le filtrat d'affinité GSH par rapport à l'extrait brut tandis que l'activité enzymatique spécifique augmentait, indiquant que l'étape de purification unique coupait les autres protéines et conservait la protéine de l'enzyme GST. Français Le CCL4 diminue le Vmax et augmente le Km pour les substrats GSH et CDNB par rapport au témoin, ce qui indique que le CCL4 peut être un inhibiteur non compétitif de l'enzyme GST tandis que le lait de chamelle augmente le Vmax et diminue le Km pour les substrats GSH et CDNB, ce qui indique que le lait de chamelle augmente l'affinité de l'enzyme pour les deux substrats. L'activité de la GST a augmenté en augmentant la concentration du substrat jusqu'à atteindre l'activité maximale après laquelle l'activité de la GST forme un plateau. En ce qui concerne l'effet de la température sur l'activité de la GST, l'activité maximale de la GST a été observée entre 25 et 35 °C et inactivée au-dessus de 40 °C. L'activité de la GST a augmenté lorsque le pH a augmenté progressivement jusqu'à atteindre l'activité maximale à une valeur de pH de 7,1 et a diminué lorsque le pH a augmenté. Notre conclusion indique que le CCL4 est un inhibiteur non compétitif de l'enzyme GST tandis que le lait de chamelle augmente l'activité et l'affinité de l'enzyme envers ses deux substrats.