Journal des techniques de chromatographie et de séparation
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Abstrait

Purification et caractérisation biochimique d'un inhibiteur de la protéinase thiol de type cystatine issu de Cicer arietinum (pois chiche)

Sheraz AB, Waseem FB, Aaliya S, Shahnawaz KM, Rizwan HK et Bilqees B*

Les cystatines sont des inhibiteurs de la thiol-protéinase omniprésents dans de nombreuses plantes ainsi que dans les tissus animaux. Dans la présente étude, un inhibiteur de la thiol-protéinase de type cystatine a été isolé du pois chiche en utilisant le fractionnement au sulfate d'ammonium (40-60 %) et la chromatographie par filtration sur gel sur une colonne Sephacryl S-100 HR avec un rendement de 21,09 % et une purification par pli de 78,89. Il a donné une masse moléculaire d'environ 25,3 kDa telle que déterminée par SDS-PAGE, diffusion dynamique de la lumière (DLS) et par son comportement de filtration sur gel. L'inhibiteur s'est avéré avoir une très faible teneur en glucides (0,34 %) et une faible quantité (1,45 %) de sulfhydryle. Français Les coefficients de rayon de Stokes, de frottement, de diffusion et de sédimentation du CPC étaient respectivement de 4,299 × 10 ^-8 g/s, 22,82 Å, 12,68 × 10 ^-7 cm ² s ^-1 et 2,64 S. L'analyse cinétique du CPC avec des thiol protéases (papaïne, ficine, bromélaïne) a révélé le mode d'inhibition réversible et compétitif, le CPC montrant la plus grande efficacité inhibitrice contre la papaïne (Ki = 0,82 nM) suivie de la ficine (Ki = 17,6 nM) puis de la bromélaïne (Ki = 41,3 nM). Le CPC possédait environ 25,34 % de contenu hélicoïdal α tel qu'évalué par spectroscopie CD. Les spectres UV-Visible et de fluorescence ont indiqué que lors de la formation du complexe papaïne-CPC, il y a un changement conformationnel significatif dans l'une ou les deux protéines du complexe.