Mandala de Wilson Lewis1
Les réponses cellulaires aux stimuli immunologiques sont souvent localisées dans des sites inflammatoires et impliquent un certain nombre de types de cellules. Ces réponses peuvent être caractérisées fonctionnellement au niveau de la cellule unique sur la base des types de cytokines exprimées. La capacité de mesurer les réponses cellulaires spécifiques à l'antigène au niveau de la cellule unique est un outil important avec un large éventail d'applications potentielles allant des études de la pathogénèse des maladies à l'évaluation des vaccins. Un certain nombre d'expériences ont été réalisées dans cette étude afin d'établir les conditions optimales pour stimuler la production de cytokines in vitro par les lymphocytes et les monocytes dans des échantillons de sang prélevés sur des participants adultes en bonne santé du Malawi et les conditions de coloration optimales pour diverses cytokines et types de cellules. Différentes méthodes et conditions de stimulation, différents tubes de culture et incubateurs et différentes conditions de marquage des anticorps ont été évalués afin d'établir des conditions optimales.
Français L'utilisation de PMA plus Ionomycine a produit les lymphocytes T les plus producteurs de cytokines tandis que le LPS était un meilleur stimulant pour les monocytes producteurs de cytokines. La stimulation du sang total pendant cinq heures était optimale pour la détection des cytokines dans les lymphocytes T, tandis que quatre heures étaient optimales pour les monocytes. Le BFA s'est avéré être un meilleur bloqueur de Golgi que la Monensine et l'utilisation de tubes en polypropylène de type Falcon de 15 ml à l'arrêt a permis de détecter la plus grande proportion de cellules productrices de cytokines. Les lymphocytes T se sont révélés être producteurs principalement de TNF-α, d'IFN- et d'IL-2 tandis que les monocytes produisaient principalement du TNF-α et de l'IL-6. 2 µl d'anti-CD3-PerCP, 2 µl d'anti-CD14-APC et 4 µl d'anti-cytokine-PE ont donné les meilleurs résultats. Les monocytes produisant le plus de cytokines ont été détectés lorsque 2 ml de solution de lyse FACS ont été utilisés par rapport aux autres volumes. Ces conditions optimales sont essentielles pour déterminer la proportion de cellules productrices de cytokines à l’aide de l’ICS.