Journal de la science cellulaire et de la thérapie
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Abstrait

Transplantation de cellules souches de moelle osseuse non myéloablative pour le traitement de la myodystrophie chez la souris mdx

VM Mikhailov, AV Sokolova, VV Kravtsova, VV Zenin, EV Kaminskaya, NA Timonina et II Krivoi

Contexte : Les souris Mdx sont un modèle expérimental de la dystrophie musculaire de Duchenne (DMD), une maladie monogénique humaine incurable. L'espoir de guérison est associé à l'utilisation de thérapies par cellules souches en particulier mais pas exclusivement. L'analyse de multiples résultats expérimentaux montre que la transplantation intramusculaire de différents types de cellules d'origines différentes avec des propriétés de cellules souches ne peut pas convertir les fibres musculaires striées (SMF) mutantes en SMF de type sauvage. Il a été conclu que seul le remplacement de la moelle osseuse (MO) mutante par des cellules de MO de type sauvage peut convertir les SMF mutantes en SMF de type sauvage. Malheureusement, l'irradiation aux rayons X de souris mdx à une dose létale de 11, 7 ou 5 Gy suivie d'une transplantation de cellules de MO de souris sauvages C57BL/6 n'a pas augmenté la synthèse de dystrophine SMF. Le but de cette étude était d'analyser la synthèse de dystrophine par les muscles striés de souris mdx après une irradiation aux rayons X à une dose de 3 Gy suivie d'une transplantation de cellules de moelle osseuse C57BL/6. Nous étudions également la réparation de la structure des fibres musculaires du diaphragme NMJ. Pour confirmer la signification fonctionnelle des changements structurels observés des NMJ, une étude du potentiel de membrane au repos des fibres musculaires du diaphragme NMJ a également été menée. Méthodes : Des souris mdx âgées de 1 à 1,5 mois ont été irradiées par des rayons X à une dose de 3 Gy. Le lendemain, des cellules de moelle osseuse fraîchement préparées ont été injectées par voie intraveineuse à raison de (15-20) x 106 cellules par souris. Les animaux ont été étudiés pendant 2, 4 et 6 mois après la transplantation. Chaque groupe expérimental de souris comprenait 3 à 8 animaux. Mus. quadriceps femoris et les fibres musculaires du diaphragme avec leurs jonctions nerf-muscle (NMJ) étaient à l'étude. Pour l'enregistrement du chimérisme, une étude spéciale a été menée en utilisant la transplantation de cellules de moelle osseuse C57BL/6 GFP-positives à des souris mdx après une irradiation de 3 Gy. Pendant 6 mois, les cellules de moelle osseuse ont été séparées des os longs et des frottis ont été préparés. Français Après fixation au carbinol, les frottis ont été colorés à l'iodure de propidium et étudiés au microscope confocal LSM 5 Pascal (Carl Zeiss, Allemagne) pour compter la part de cellules GFP-positives par rapport à la quantité totale de cellules nucléaires. Résultats : Nous avons observé une croissance stable de la synthèse de dystrophine après irradiation non létale aux rayons X à une dose de 3 Gy. La part de SMF dystrophine positive de M. quadriceps femoris a augmenté de 1 % jusqu'à 4 % (2 mois), 12 % (4 mois) et 27 % (6 mois) après la transplantation. La croissance de la synthèse de dystrophine s'est accompagnée d'une diminution du taux de mortalité du SMF, d'une augmentation de la part de SMF sans noyau central jusqu'à 22 %, d'une accumulation de branches de MNJ et d'une réparation des potentiels de membrane de repos. La proportion de cellules GFP-positives entre toutes les cellules nucléaires sur les frottis de moelle osseuse de souris mdx transplantées avec GFP chimérique à 6 mois après la transplantation était de 3,3 ± 0,8 %, ce qui montre la nature chimérique des souris. Conclusion : La transplantation de cellules de moelle osseuse non myéloablatives de souris mdx après irradiation aux rayons X 3 Gy s'accompagne de la formation d'un chimérisme,croissance stable de la synthèse de la dystrophine et réparation de la structure et de la fonction des NMJ.