Journal of Glycomics & Lipidomics
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Abstrait

Profils de N-glycosylation des glycoprotéines d'immunoglobuline Y de poulet exprimées par différents véhicules de production

Sachiko Kondo, Hirokazu Yagi, Yukiko Kamiya, Akihiko Ito, Motoki Kuhara, Ayako Kudoh, Noriko Takahashi and Koichi Kato

L'immunoglobuline Y (IgY), abondante dans le jaune d'œuf, est largement utilisée comme réactif immunochimique et a récemment été appréciée comme outil thérapeutique potentiel. La portion Fc de l'IgY conserve un site de N-glycosylation à Asn407, qui est structurellement équivalent aux sites de glycosylation conservés d'autres classes d'Ig chez les mammifères. Malgré ces similitudes, les IgY du sérum de poulet et du jaune d'œuf se sont révélées être des glycoformes distinctes, comme en témoigne la forte incidence d'oligosaccharides monoglucosylés de type mannose élevé, que l'on trouve rarement dans les glycoprotéines des mammifères. Pour mieux comprendre les propriétés de glycosylation de l'IgY, nous rapportons un profil comparatif de N-glycosylation d'IgY de poulet recombinantes qui ont des séquences d'acides aminés identiques dans leurs régions variables mais sont exprimées par des véhicules de production différents. Les oligosaccharides liés à l'N clivés de ces IgY ont été soumis à une cartographie HPLC multidimensionnelle en conjonction avec des analyses spectrométriques de masse. Les profils de N-glycosylation des IgY ont montré des schémas clairement différents selon le véhicule de production. Alors que les IgY exprimées par les cellules d'hybridome de poulet ont conservé les oligosaccharides prématurés de type mannose élevé, les IgY exprimées par les cellules CHO ont subi un traitement N-glycane important et ont affiché des oligosaccharides antennaires élevés. Des différences significatives ont également été observées dans les niveaux de fucosylation du noyau et de N-acétylglucosaminylation bissectrice et dans les types de liaison sialyle parmi les IgY exprimées par différents véhicules. Malgré ces différences, les anticorps IgY recombinants exprimaient généralement des populations considérables de glycoformes monoglucosylées, ce qui suggère que cette caractéristique de glycosylation est, dans une certaine mesure, associée à la structure quaternaire distinctive de l'IgY-Fc, qui, au moins partiellement, masque les N-glycanes Asn407 et les isole des mécanismes chaperons dans le réticulum endoplasmique. Nous suggérons que le moment et l'efficacité du traitement du N-glycane et la formation de la structure quaternaire de l'IgY sont considérablement différents de ceux de l'IgE et dépendent des véhicules utilisés pour la production d'IgY recombinante, ce qui entraîne une incidence variable d'espèces monoglucosylées.