Ingénierie enzymatique
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Abstrait

Isolement, purification et caractérisation de la structure secondaire et étude cinétique de la lipase de la carpe majeure indienne, Catla catla (Catla)

Kameshwar Sharma YVR, Neelima Boora et Prasidhi Tyagi

Les lipases sont des enzymes omniprésentes qui catalysent l'hydrolyse des graisses en acides gras et en glycérol à l'interface eau-lipide et inversent la réaction dans les milieux non aqueux. Les lipases occupent une place de choix parmi les biocatalyseurs en raison de leurs applications nouvelles et multiples en oléochimie, synthèse organique, formulation de détergents et nutrition. La lipase a été extraite et isolée du tube digestif et du tube digestif de Catla catla (catla). Le tissu a été homogénéisé dans un rapport de 1:3 avec un tampon de départ (0,01 M TrisHCl, pH 7,2). L'extrait brut ainsi obtenu a été précipité à l'aide de sulfate d'ammonium (20-80 %). L'excès de sel a été éliminé par dialyse et le dialysat résultant (enzyme dessalée) a été soumis à une colonne DEAE-Cellulose pour chromatographie d'échange d'ions à un débit de 0,5 ml/min. Français L'élution a été réalisée par un gradient échelonné de NaCl (100-800 mM) dans le tampon de départ. Les fractions actives ont été regroupées sous forme de fraction purifiée (PF) et ont été utilisées pour la caractérisation physique du pH, de la température et de l'effet du calcium sur l'activité enzymatique, la caractérisation structurelle, la caractérisation moléculaire et pour des études cinétiques. La fraction purifiée (PF) a montré une activité spécifique finale de 1438,72 U/mg. Le pH optimal était de 7,8 et la température optimale s'est avérée être de 20 °C. La valeur de la température de fusion (Tm) était de 42 °C et l'énergie d'activation de la lipase purifiée était de 34,82 KJ/mol/K. La stabilité thermique de la lipase s'est avérée être à 20 °C. L'activité de la lipase a été conservée jusqu'à 3 h d'incubation avec 10 mM et 20 mM de CaCl2 dans le tampon de départ. Cela montre que le calcium a la propriété d'améliorer la dénaturation de l'enzyme. La constante de Michaelis-Menten (Km) de la lipase de la carpe majeure indienne, catla pour l'hydrolyse du pNPP était de 6,695 mM. Le nombre de renouvellements (kcat) de la lipase (catla) était de 0,0022 s-1. L'efficacité catalytique (kcat/Km) de la lipase était de 0,0003412 s-1 mM-1. La SDS-PAGE de la lipase purifiée (PF) a révélé une bande unique homogène avec une masse moléculaire de 70 kDa. L'arrangement structural secondaire des hélices α et des brins β de la lipase purifiée donne respectivement 48,51 % et 9,74 % en utilisant le dichroïsme circulaire.