Journal des techniques de chromatographie et de séparation
Libre accès
ISSN: 2157-7064
ISSN: 2157-7064
Sassi A, Hassairi A, Kallel M, Jaidane M et Saad SAGUEM
Une nouvelle méthode de chromatographie liquide haute performance a été développée pour étudier la diffusion de l'halofuginone dans la paroi de l'uretère. Les extraits d'uretère humain ont été préparés par digestion trypsique des tissus suivie d'une extraction liquide-liquide à l'aide d'isopropanol après précipitation des protéines. La méthode utilisait une colonne C18 en phase inverse avec une phase mobile délivrée à la colonne analytique selon un programme de gradient commençant par une composition d'acétate d'ammonium (pH 4,7 ; 10 mM)-acétonitrile-triéthylamine (70:30:0,2, v/v/v) et des changements linéaires à 90 % d'acétonitrile à 11 min. L'extraction liquide-liquide s'est avérée sélective pour l'HFG et a fourni un taux de récupération élevé de 97,7 %. La méthode HPLC a été validée avec succès en appliquant le nouveau protocole de validation en utilisant le profil de précision basé sur un nouveau concept, celui de l'erreur totale. Le protocole V4, avec cinq niveaux de concentration et 105 essais, a été sélectionné selon l'algorithme conçu par le comité SFSTP 2003. Les limites d'acceptation ont été fixées à  20 %, tandis que le risque a été fixé à 5 %. La méthode s'est avérée précise sur une plage de concentrations de 0,2 à 10 μg/ml. La limite de détection pour le HFG était de 0,06061 μg/ml. Afin de démontrer l'applicabilité de cette méthode dans une application ex vivo, la quantification du HFG dans la paroi a été appliquée pour étudier sa distribution à partir d'un gel (0,03 % p/p de HFG) dans l'uretère humain