Journal des techniques de chromatographie et de séparation
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Abstrait

Étude de la dégradation forcée d'un anticorps monoclonal par chromatographie liquide bidimensionnelle

An Y, Verma S, Chen Y, Yu S, Zhang Y, Kelner S, Mengisen S, Richardson D et Chen Z

Les produits d'anticorps monoclonaux (mAb) sont extraordinairement hétérogènes en raison de la présence d'une variété de modifications enzymatiques et chimiques, telles que la désamidation, l'isomérisation, l'oxydation, la glycosylation, la glycation, la cyclisation terminale, l'agrégation et la fragmentation. L'étude de dégradation forcée est une pratique courante pour évaluer les modifications potentielles et les voies de dégradation des mAbs dans des conditions extrêmes, notamment l'exposition à la lumière et le pH local extrême. Les échantillons dégradés sont soumis à une caractérisation à l'aide d'un large éventail d'analyses, notamment la chromatographie par échange d'ions (IEC) pour les variantes de charge et la chromatographie d'exclusion de taille (SEC) pour les variantes de taille. Dans cette étude de validation de principe, une approche de chromatographie liquide bidimensionnelle (2D-LC) a été appliquée avec succès aux échantillons de dégradation forcée des mAb pour l'évaluation de la distribution de taille dans le profil de charge IEC. Les pics variants de charge dans l'IEC de première dimension (1D) ont été fractionnés par un programme de coupe en cœur, et la fonction de stationnement de pic intégrée a pris en charge les coupes 1D à élution ultérieure lorsque les précédentes étaient encore sous analyse de deuxième dimension (2D). Ainsi, pour une injection d'IEC unique, toutes les fractions d'IEC ont été acquises par l'analyse 2D pour SEC. Cette étude a démontré que la SEC 2D était compatible avec l'IEC 1D pour l'analyse 2D-LC. La sensibilité de la méthode était suffisante pour déterminer les agrégats et les fragments dans chaque coupe d'IEC individuelle. Les agrégats et fragments totaux calculés dans les échantillons mAb-1 stressés étaient comparables à ceux détectés par SEC unidimensionnel. Plus important encore, l'approche 2D IEC-SEC était capable de relier les variantes de charge et de taille d'Ab en temps réel et de manière efficace. Il a été observé que les agrégats étaient enrichis dans la région la plus basique du profil de charge IEC, en particulier dans les échantillons fortement dégradés. Il s'agit de la première application IEC-SEC 2D-LC pour l'analyse d'anticorps intacts selon les connaissances des auteurs.