Ingénierie enzymatique
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Abstrait

Découverte de mutations génétiques par l'enzyme : des puces pour une méthode simple et très délicate de clivage des mésappariements enzymatiques

Voskarides K

La détection de variétés d'ADN inconnues est l'une des questions importantes dans de nombreux domaines de la science atomique. Le séquençage de Sanger a été utilisé dans la pratique quotidienne pour cette raison. Cependant, lorsque vous devez analyser un ADN de grande taille ou de nombreux échantillons, cette méthode est difficile, coûteuse et fastidieuse. Récemment, le séquençage futur (NGS) a été utilisé dans diverses motivations derrière le dépistage des mutations. Cette technologie de séquençage à grande échelle est adaptée à une certaine taille de dépistage de la taille du génome, ainsi qu'à l'analyse de la liste des gènes qui provoquent des agrégats similaires, par exemple le diabète de type 2 à l'origine du développement (MODY). Si suffisamment d'échantillons sont collectés à la fois, le NGS est une méthode à la fois amusante et attrayante, car la mise en commun des tests réduit le coût de fonctionnement par test. Cependant, si vous devez analyser 10 à 50 kb d'ADN par essai unique, vous avez besoin d'une stratégie de dépistage efficace et efficace. En général, le polymorphisme d'adaptation monocaténaire (SSCP) et l'analyse des hétéroduplex (HA) étaient les techniques les plus couramment utilisées à cette fin. Cependant, la sensibilité de ces techniques n'était pas acceptable pour l'essai approfondi. Bien qu'un nombre important de stratégies de criblage de transformation basées sur la PCR modifiées aient été proposées, aucune d'entre elles n'est devenue célèbre en raison de la faible sensibilité ou de la charge potentielle. Deux méthodes modifiées pour HA, l'électrophorèse sur gel à angle dénaturant (DGGE) et l'électrophorèse sur gel à angle de température (TGGE), ont été développées pour améliorer le retard de déplacement de l'ADN hétéroduplex dans le gel en modifiant la section du gel ou la température. Bien que ces méthodes aient peut-être une position préférée par rapport à HA, elles nécessitent un équipement spécial pour fonctionner ou fabriquer le gel. De cette façon, ces techniques modifiées ne sont pas devenues aussi populaires que la première HA. La chromatographie en phase liquide dénaturante (DHPLC) est un type d'étude de transfert de transfert qui n'implique pas l'électrophorèse, mais distingue plutôt les changements en fonction de la période de maintien réduite de l'hétéroduplex dans une section HPLC. Bien que cette nouvelle innovation permette une sensibilité élevée, une amélioration fastidieuse des conditions de reconnaissance des changements pour chaque groupe d'ADN est nécessaire pour obtenir la sensibilité la plus élevée. Une technique de criblage de changement idéale nécessiterait uniquement du matériel et des réactifs traditionnels ; une convention unique peut être appliquée à tous les groupes d'ADN et types de changement ; et permettrait d'obtenir une sensibilité élevée, un débit élevé et une exécution à coût élevé. Le clivage par erreur de composé (EMC) satisfait probablement à ces normes.