Journal d'ophtalmologie clinique et expérimentale
Libre accès
ISSN: 2155-9570
ISSN: 2155-9570
Shijia Zhang, Ladan Espandar, Kathleen MP Imhof et Bruce A. Bunnell
Objectif : Évaluer la différenciation des cellules souches humaines dérivées du tissu adipeux (hASC) vers la lignée des kératocytes par co-culture avec des kératocytes primaires in vitro .
Matériel et méthodes : Un système de co-culture utilisant des inserts Transwell pour faire pousser des hASC en bas et des kératocytes en haut dans un milieu de différenciation des kératocytes (KDM) a été développé. Les hASC cultivées dans un milieu de culture complet (CCM) et du KDM ont été utilisées comme contrôle. Après 16 jours, les hASC ont été examinées pour détecter les changements morphologiques et la prolifération par comptage cellulaire. La qRT-PCR et la cytométrie de flux ont été utilisées pour détecter l'expression de la famille de l'aldéhyde déshydrogénase 3, membre A1 (ALDH3A1) et du kératocan.
Résultats : Les hASC sont devenues plus dendritiques et allongées dans le système de co-culture par rapport au CCM et au KDM. Le temps de doublement des cellules était plus long à mesure que la différenciation progressait. La qRT-PCR a montré une nette tendance à l'augmentation de l'expression d'ALDH3A1 et de kératocane dans le système de co-culture malgré des valeurs de p statistiquement non significatives. La cytométrie de flux a montré une augmentation significative des taux de protéines d'ALDH3A1 et de kératocane dans le système de co-culture par rapport au groupe CCM (p < 0,001) et même par rapport au groupe KDM (p < 0,001 pour ALDH3A1 et p < 0,01 pour kératocane).
Conclusion : La méthode de co-culture est une approche prometteuse pour induire la différenciation des populations de cellules souches avant les applications in vivo. Cette étude révèle un potentiel important pour la bio-ingénierie du tissu cornéen à l'aide de cellules souches multipotentielles autologues.