Journal des techniques de chromatographie et de séparation
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Abstrait

Développement d'une méthode métabolomique de chromatographie liquide hydrophile zwitterionique (ZIC‡HILIC-MS) pour l'analyse par microscopie électronique de l'urine humaine

Drupad K Trivedi, Huw Jones, Ajit Shah et Ray K Iles

L'urine est un produit du métabolisme du corps et la majorité des produits métaboliques sortant par le système rénal sont rendus polaires afin d'être solubles dans l'eau. La résolution des métabolites urinaires pour les études métabolomiques nécessite le développement de techniques de séparation HPLC qui correspondent à cette caractéristique de la chimie biologique. ZIC-HILIC est un candidat idéal pour faire avancer la résolution de ces métabolites lorsque la phase inverse est incapable de donner une séparation adéquate. Les données métabolomiques doivent être traitées par analyse multivariée Shotgun pour passer au crible des milliers d'analytes et leurs variables telles que l'intensité des ions. Dans le développement de la séparation ZIC-HILIC avec détection par spectrométrie de masse (IT-ToF), la variabilité méthodologique doit être minimisée afin que toute analyse de données Shotgun ne révèle pas d'analytes biomarqueurs potentiels qui sont des artefacts ou sont affectés négativement par la technique de séparation et de détection. Nous rapportons ici le développement d'une méthode de spectrométrie de masse ZIC-HILIC adaptée à l'analyse des données SIMCA P+ de l'urine. Des variables telles que la résolution, la reproductibilité des analyses et la température de stockage des échantillons ont été évaluées en tandem avec l'analyse des données SIMCA P+ et le prétraitement du contrôle qualité. La méthode développée associe des analyses de contrôle qualité qui prétraitent et excluent les analytes qui ne sont pas suffisamment robustes pour d'autres études de biomarqueurs candidats. Cela signifie que les analytes labiles qui ne pouvaient pas être reproduits dans 70 % des analyses de CQ (qui sont des pools de tous les échantillons analysés ce jour-là) ont été exclus. Cependant, les échantillons d'urine stockés à 4°C pendant plus de 9 mois contiendront des métabolites qui s'altéreront et produiront des artefacts de marqueurs à petites molécules par rapport aux échantillons stockés à -20°C. En conclusion, la méthode développée est une méthode robuste d'analyse par spectrométrie de masse ZIC-HILIC adaptée à la découverte de biomarqueurs robustes dans le métabolome urinaire.