Journal des sciences agricoles et de la recherche alimentaire
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Abstrait

Développement d'immuno-essais Rapidot pour la détection du virus du Bunchy Top du Banane

Namratha ND, Narayan BM, Chougal A et Chidanand AR

Français Le BBTV a été utilisé comme antigène pour produire un anticorps variable à fragment de chaîne unique (scFv) en utilisant la technologie d'affichage de phages. Deux clones présentant la lecture la plus élevée dans l'ELISA monoclonal ont été sélectionnés, à savoir, pBSNMAB5 et pBSNMAB40. Les fragments d'anticorps à chaîne unique de pBSNMAB5 et pBSNMAB40 ont été sous-clonés dans le vecteur d'expression corporel pQUANTa qui a permis la fusion transcriptionnelle avec le fragment d'anticorps monoclonal scFv et le gène codant pour l'enzyme phosphatase alcaline (PhoA). Les clones ont été séquencés avec l'amorce avant LMB3 et l'amorce inverse pHEN et caractérisés. Les gènes scFv des deux clones avaient une longueur de 795 pb et ils ont découvert qu'ils partageaient une séquence d'homologie similaire. Les résultats des analyses BLASTn et BLASTx ont indiqué une homologie de 85 pour cent avec le gène d'anticorps Fv à chaîne unique anti-TNF alpha de construction synthétique, des cds partiels et en outre l'analyse BLASTx a montré une homologie de 86 pour cent avec la région variable de la chaîne lourde de l'anticorps des cellules B circulant (Homo sapiens). Lors de l'expression du clone, il a produit une protéine de fusion de l'ALP avec l'anticorps monoclonal pBSNMAB5 et pBSNMAB40. Le conjugué scFv-ALP a été produit contre la protéine BBTV. À l'aide de ce conjugué d'anticorps, un kit de détection a été développé. Ce kit d'immunodiagnostic Rapidot détecte le BBTV à une concentration aussi faible que 0,9 g/ml dans la membrane NC et la cassette membranaire et il a également été vérifié avec d'autres protéines pour évaluer la spécificité des monoclones élevés contre le BBTV.