Journal des techniques de chromatographie et de séparation
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Abstrait

Développement d'un test PCR en temps réel spécifique au gène COL3A1 pour des applications de détection clinique et sportive

Martinez B, Jimenez A, Diaz T, Segura J et Ferro P*

PIIINP, dont le gène est COL3A1, est une protéine utilisée comme biomarqueur, qui est altérée dans diverses pathologies telles que la stéatose hépatique d'origine non alcoolique et est également utilisée pour détecter l'abus d'hormone de croissance recombinante humaine (rhGH) par les athlètes d'élite pour améliorer leurs performances. Par conséquent, l'étude des niveaux de cette protéine ou de son gène pourrait être utile pour le diagnostic de ces pathologies, en plus d'autres utilisations. L'objectif de ce travail était le développement d'une nouvelle méthode de détection du gène COL3A1 basée sur la quantification de l'ARNm en temps réel. 10 hommes volontaires en bonne santé ont été injectés par voie intraveineuse pendant 3 jours consécutifs avec 0,026 mg-1kg-1jour-1personne-1 de rhGH, et des échantillons de sérum et de sang ont été prélevés pendant 7 jours à différents moments. L'extraction de l'ARNm a été réalisée après purification des lymphocytes selon des protocoles standard, et les échantillons ont été quantifiés par PCR quantitative en temps réel à l'aide de sondes TaqMan conçues spécifiquement pour ce gène. Les résultats ont montré une augmentation de l'expression de COL3A1 qui s'est maintenue pendant 7 jours d'échantillonnage après la dernière administration, ce qui a permis d'observer des résultats plus sensibles et plus robustes par rapport à la quantification de la protéine PIIINP dans le sérum des mêmes individus. Après la mise en place de l'essai, une validation partielle a été réalisée dans laquelle des paramètres tels que la linéarité, la variation inter et intra-essai, l'influence du sexe et de l'âge, la stabilité du stockage des échantillons sanguins à 4°C et la quantité d'échantillon sanguin ont été étudiés.