Journal des techniques de chromatographie et de séparation
Libre accès

Abstrait

Développement et validation d'une méthode de quantification du cortisol libre urinaire dans les urines de 24 heures par détection de masse

Momal Alexe*, Dhesse Quentin, Goderniaux Nicolas, Colsoul Marie-Lise, Closset Mélanie

Introduction : La mesure de l'excrétion urinaire des corticostéroïdes et de leurs métabolites est utilisée pour évaluer la fonction surrénalienne dans le syndrome de Cushing ou le cancer de la surrénale. La quantification du cortisol libre urinaire (CLU) est recommandée pour le diagnostic du syndrome de Cushing.

Objectif : Développer une technique d'analyse simple, reproductible et spécifique pour quantifier l'UFC par chromatographie liquide haute performance (UHPLC)

Méthodes : Nous avons développé une méthode basée sur un test de chromatographie liquide à ultra-haute performance (UHPLC) couplé à un détecteur de masse quadripolaire (QDa). Les échantillons ont été extraits par extraction liquide supportée (SLE). Les urines ont été prétraitées avec de l'acide formique à 1 % et l'étalon interne. Le cortisol a été élué avec du dichlorométhane. Le solvant a été évaporé et les échantillons ont été reconstitués avec de l'eau. Les composés ont été séparés sur une colonne HSS T3 avec une élution à gradient (eau, acide formique à 0,1 % et acétonitrile). Le volume d'injection était de 1 µl et le débit de 0,6 ml/min. Nous avons étudié la méthode en termes de linéarité, de précision, de récupération, d'exactitude et de limites de détection et de quantification.

Résultats : La gamme linéaire de cette méthode s'étendait de 5 µµg/l à 1000 µg/l avec un coefficient de détermination de 0,99. La précision a été évaluée par l'écart type relatif (RSD) pour les essais intra-essai et inter-essai et était inférieure à 9 % pour les deux. La méthode a montré une récupération adéquate du cortisol (> 91 %). La limite de détection était de 0,28 µg/L et la limite de quantification était de 0,75 µg/L.

Conclusion : La méthode de détection UFC UHPLC-QDa avec une étape SLE présente des performances satisfaisantes. Elle est simple, reproductible et adaptée à une utilisation en routine en laboratoire.