Journal des techniques de chromatographie et de séparation
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Abstrait

Développement d'une méthode de chromatographie liquide à réseau de diodes à très hautes performances pour quantifier le voriconazole dans le plasma humain

Yousra Elmazahy*, Ahmed Farag, Lobna Shalaby,Mohamed Nagy,

Une méthode rapide et sélective de chromatographie liquide en phase inverse (RP) par réseau de diodes (DAD) a été développée et validée pour déterminer le voriconazole dans le plasma humain. Grâce au débit élevé et à la sensibilité de la chromatographie liquide ultra haute performance (UHPLC), la durée d'exécution n'a été que de 7,5 minutes et aucun tampon n'a été utilisé. 200 μl de sérum et 200 μl d'étalon interne de fluconazole ont été ajoutés. Après une simple précipitation des protéines avec 400 μl de méthanol, 10 μl du surnageant clair se sont séparés sur la colonne Agilent Zorbax Eclipse Plus® C18 (50*2,1 mm, 1,8 μm). La température de la colonne a été maintenue à 40 °C. Le débit était de 0,4 ml/min en utilisant une élution en gradient de méthanol et d'eau. Le temps de rétention du fluconazole et du voriconazole était respectivement de 4,2 et 6,2 min. La détection a été réalisée à l'aide d'un détecteur à barrette de diodes réglé à une longueur d'onde de 261 nm. La méthode a été optimisée et validée conformément aux directives de la FDA pour l'industrie, validation des méthodes bioanalytiques. L'adéquation du système, en termes de plateaux théoriques, de résolution, de traînée et de précision d'injection en termes de temps de rétention et de surface, a été réalisée pour garantir l'adéquation et l'efficacité du système chromatographique conformément aux directives de l'ICH. La méthode développée a fourni des résultats exceptionnels en termes de récupération, d'exactitude, de précision, de sélectivité, de stabilité et de reproductibilité. La courbe d'étalonnage était linéaire sur une plage de 0,2 à 12 μg/ml avec un coefficient de corrélation de 0,9997c, couvrant de manière adéquate la plage thérapeutique pour une surveillance appropriée des médicaments. La limite de détection et de quantification était respectivement de 0,2 μg/ml et de 0,5 μg/ml. Les CV d'exactitude et de précision intrajournalière étaient respectivement de 91,2 %-120 % et de 0,8 %-6,8 %, et les CV d'exactitude et de précision interjournalières étaient respectivement de 92,6 %-115 % et de 2,5 % à 7,5 %. La récupération absolue était de 100 % ± 15 % pour le voriconazole.