Journal de la science cellulaire et de la thérapie
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Abstrait

Conception et caractérisation moléculaire du transgène C-Kit pendant la spermatogenèse chez la souris

Swanand Koli, Arun P Sikarwar, Murali R Babu and Reddy KVR

Dans le testicule postnatal, les cellules souches spermatogoniales de type A (SSC) indifférenciées se différencient en cellules spermatogoniales de type B (SGC) en présence de c-Kit, qui est exprimé de manière spécifique à la cellule/au stade au cours de la spermatogenèse chez les mammifères. c-Kit est soumis à un contrôle transcriptionnel strict car il est essentiel non seulement pour les cellules germinales mais aussi pour le développement des cellules souches hématopoïétiques et des mélanocytes. Bien que l'expression de c-Kit soit un processus régulé de manière dynamique, la base moléculaire de sa régulation transcriptionnelle au cours de la spermatogenèse reste en grande partie non identifiée. L'objectif de l'étude est de déterminer si l'introduction d'une construction transgénique exprimant c-Kit dans des SSC négatives à c-Kit isolées de souris mutantes Wv/Wv se différenciera et colonisera le testicule des souris receveuses. À cette fin, une construction transgénique pG1-Kit-ORF-GFP de 7,4 kb contenant une cassette d'expression c-Kit-ORFGFP de 4,4 kb a été conçue et son expression in vitro a été confirmée par immunofluorescence et analyse par cytométrie de flux. Pour comparer les résultats, trois constructions de contrôle-GFP, ayant 1,1 kb (sans promoteur c-Kit et ORF), 4,1 kb (sans promoteur c-Kit) et 1,4 kb (sans ORF c-kit) ont également été conçues et introduites dans des SSC par électroporation (EP). Ces SSC ont été introduites dans les testicules de souris stériles receveuses traitées au busulfan via rete en utilisant l'approche de transplantation de cellules germinales (GCT). Il a été observé que les SSC portant l'insert transgénique c-Kit-ORF-GFP étaient capables de coloniser et de se différencier en d'autres lignées de cellules germinales dans les tubes séminifères des souris receveuses par rapport aux témoins. En conclusion, les souris mutantes Wv/Wv testiculaires ont une population de cellules souches embryonnaires (SSC) dans laquelle la fonction de signalisation c-Kit est altérée. Pour la première fois, nous signalons que la fonction des SSC chez les souris stériles réceptrices pourrait être rétablie avec l'introduction de l'insertion du transgène c-Kit-ORF-GFP. Ainsi, les présentes découvertes pourraient avoir un impact significatif sur la compréhension de la physiologie de la reproduction et sur le potentiel de nouvelles thérapies futures chez les patients atteints d'insuffisance testiculaire.