HIRA Kumari Shah
L'effet cytotoxique de l'eugénol sur l'expression de marqueurs moléculaires liés à la différenciation ostéogénique des cellules pulpaires dentaires humaines, tels que la synthèse du collagène et l'expression de deux gènes liés à l'ostéogenèse, la phosphatase alcaline (ALP) et la sialoprotéine osseuse (BSP), a été étudié à l'aide de cellules pulpaires dentaires humaines (cellules D824). La croissance et la survie cellulaires ont été diminuées par le traitement des cellules avec de l'eugénol de manière dépendante de la concentration. Le taux d'incorporation de [3H] proline dans la fraction insoluble dans l'acide et la synthèse des collagènes de type I–V ont également été réduits par le traitement des cellules avec de l'eugénol de manière dépendante de la concentration. L'expression de l'ARNm de l'ALP a été à peine affectée dans les cellules exposées à l'eugénol, tandis que l'expression de l'ARNm et des protéines de la BSP a été régulée à la baisse en fonction des concentrations d'eugénol. Les résultats suggèrent que, comme la synthèse du collagène et l'expression de la BSP jouent un rôle essentiel dans la formation des tissus durs, l'eugénol utilisé pour le traitement endodontique peut entraîner des effets cytotoxiques sur la fonction normale des cellules souches dont l'existence est signalée dans le tissu pulpaire dentaire humain et le ligament parodontal. L'eugénol (4-allyl-2-méthoxyphénol) est le principal composant de l'huile de clou de girofle (Eugenia caryophyllate). Il est utilisé comme parfum et agent aromatisant, comme attractif pour les insectes et comme analgésique antiseptique et anti-inflammatoire topique en dentisterie. Mélangé à l'oxyde de zinc dans une pâte épaisse, l'eugénol est également utilisé en dentisterie comme composant de pansements parodontaux, de matériaux d'empreinte et de médicaments endodontiques. Certains des médicaments endodontiques administrés aux dents peuvent atteindre le tissu pulpaire ou le parodonte après avoir pénétré l'émail et la dentine ou avoir traversé les foramens apicaux, respectivement [1]. Si les médicaments endodontiques étaient cytotoxiques, ils pourraient perturber la fonction normale des cellules souches dont l'existence est signalée dans le tissu pulpaire dentaire humain [2] et le ligament parodontal [3]. Il est donc important d'étudier la cytotoxicité des agents chimiques utilisés pour le traitement endodontique. Malgré son utilisation clinique extensive en dentisterie, l'eugénol est cytotoxique pour plusieurs types de cellules humaines, notamment les cellules pulpaires dentaires [4], les fibroblastes gingivaux [5] et les fibroblastes du ligament parodontal [6]. La cytotoxicité de l'eugénol démontrée dans presque toutes les études a été déterminée par la croissance ou la viabilité des cellules traitées à l'eugénol. Peu d'études ont été réalisées pour déterminer l'effet cytotoxique de l'eugénol sur les phénotypes liés à la différenciation dans les cellules pulpaires dentaires humaines. Dans la présente étude, nous avons étudié l'effet cytotoxique de l'eugénol sur l'expression de marqueurs moléculaires liés à la différenciation ostéogénique des cellules pulpaires dentaires humaines telles que le collagène.
Effet cytotoxique de l'eugénol sur l'expression de la différenciation moléculaire et ostéogénique des cellules pulpaires dentaires humaines HIRA kumari Shah Bharatpur Central Hospital, Népal
synthèse et l'expression de deux gènes liés à l'ostéogenèse, la phosphatase alcaline (ALP) et la sialoprotéine osseuse (BSP), dans les cellules pulpaires dentaires humaines. Goldberg et al. [7] ont démontré que les protéines liées à l'ostéogenèse, notamment le collagène, l'ALP et la BSP, sont synthétisées au cours de la dentinogenèse physiologique et réparatrice. Le collagène, en particulier de type I, compose 90 % de la matrice dentinaire. La matrice de collagène fournit non seulement l'échafaudage pour promouvoir et développer un tissu minéralisé, mais aussi un excellent support naturel pour les protéines non collagènes telles que la BSP et la sialoprotéine dentinaire [7]. L'ALP est un facteur essentiel dans la minéralisation de la dentine et dans la formation du cément acellulaire [8]. La BSP est l'une des protéines non collagènes trouvées dans l'os, la dentine et la pulpe dentaire [9], et considérée comme un marqueur précoce de la différenciation des ostéoblastes [10] et des cellules de type odontoblaste [11]. Il se lie aux résidus spécifiques du collagène de type I [12] et sert de puissant nucléateur de la formation d'hydroxyapatite sur les fibrilles de collagène [11]. Des cellules pulpaires dentaires humaines (cellules D824) dérivées du tissu pulpaire dentaire obtenu à partir d'une troisième molaire inférieure extraite d'une femme (22 ans) ont été cultivées comme décrit précédemment [13]. Les cellules D824 ont la capacité de former des nodules minéralisés in vitro et de recruter des cellules de type odontoblaste et du tissu de type dentine chez des souris immunodéprimées [13]. Toutes les expériences ont été réalisées en utilisant des cellules D824 à 10-15 passages. L'eugénol (> 95 % pur) a été acheté auprès de Tokyo Kasei Kogyo (Tokyo, Japon) et dissous à 200 mM dans du diméthylsulfoxyde (DMSO) (Sigma-Aldrich, Tokyo, Japon). La solution a été diluée avec du milieu de culture aux concentrations souhaitées et appliquée aux cellules D824. La survie cellulaire a été déterminée par l'efficacité de formation de colonies de cellules traitées à l'eugénol. Les cellules (500) ont été plaquées en triple sur des boîtes de 60 mm et incubées pendant une nuit. Les cellules ont été traitées à l'eugénol à diverses concentrations pendant 24 h. Les cultures témoins ont été incubées avec du milieu DMSO. Après deux lavages avec 2 ml de milieu frais, les cellules ont été incubées pendant 13 jours pour la formation de colonies. Les cellules ont été fixées avec du méthanol absolu et colorées avec une solution de Giemsa à 10 %. Thompson et al. [19]. ont démontré que l'eugénol est métabolisé en intermédiaire réactif, peut-être un méthide de quinone, dans des hépatocytes de rat isolés et que les effets cytotoxiques de l'eugénol dans les hépatocytes dépendent du métabolisme. L'eugénol provoque une synthèse d'ADN non programmée dans des cellules d'embryon de hamster syrien (SHE) en présence d'un mélange de surnageant post-mitochondrial de foie de rat (PMS) [20]. Il induit également des aberrations chromosomiques dans les cellules SHE et les fréquences des aberrations chromosomiques