Journal d'ophtalmologie clinique et expérimentale
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Abstrait

Expression génique contrôlable de l'urokinase dans les cellules du réseau trabéculaire

Mei Tsuda, Shiho Kaneko, Akira Ando, ​​Tetsuya Nishimura, Emiko Okuda-Ashitaka, Seiji Ito, Makoto Taomoto, Miyo Matsumura et Kanji Takahashi

Objectif : Le glaucome est un type de neuropathie optique progressive qui conduit finalement à la cécité liée à une pression intraoculaire (PIO) élevée. L'accumulation de matrice extracellulaire dans le réseau trabéculaire (TM) et les tissus conjonctifs juxta-canaliculaires, qui forment une voie d'écoulement de l'humeur aqueuse, peut être une cause majeure d'augmentation de la PIO, ainsi le système fibrinolytique peut être associé à la régulation de la PIO. Nous avons examiné la possibilité d'un transfert de gène contrôlable de l'activateur du plasminogène de l'urokinase (uPA) dans les cellules TM.
Méthodes : Les cellules TM ont été fraîchement isolées à partir d'yeux de porc et de cellules TM humaines obtenues au cours de procédures de trabéculectomie et mises en culture. L'ARN total a été extrait des cellules TM humaines et rétrotranscrit en ADNc. Une méthode de réaction en chaîne par polymérase à transcription inverse (RT-PCR) a ensuite été réalisée pour détecter l'expression génique de l'uPA. L'ADNc de l'uPA humaine a été sous-cloné dans un vecteur d'expression (vecteur pEYFP-N1) et un vecteur d'expression contrôlable (vecteur TRE-Tight), puis chaque vecteur a été transfecté indépendamment dans des cellules TM porcines en culture. De la doxycycline a été ajoutée au milieu de culture pour activer les vecteurs pTet-ON et TRE-Tight. Enfin, l'expression de l'uPA a été examinée à l'aide d'un test immuno-enzymatique (ELISA).
Résultats : Les résultats de l'ELISA ont révélé l'expression de l'uPA (3,5 ng/ml) dans le milieu à partir de cellules TM porcines en culture qui avaient été transfectées avec le gène uPA humain à l'aide du vecteur pEYFP-N1. La doxycycline a induit l'uPA humaine dans les vecteurs pTet-On et TRE-Tight avec des cellules TM co-transfectées par le gène uPA humain de manière dose-dépendante.
Conclusions : Le transfert génique contrôlable de l'uPA, qui peut dégrader la matrice extracellulaire du tissu conjonctif juxta-canaliculaire, dans les cellules TM a été réalisé à l'aide d'un système Tet-On. La présente méthode peut être utile comme nouvelle thérapie pour le glaucome.