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Abstrait

Articulation d'Escherichia coli et purification de l'interféron alpha humain fusionné avec SAK

Raj Gaikwad

Une stratégie pour améliorer le repliement et la filtration de l'interféron humain α (rhIFN α2b) induit par E. coli à partir de corps d'incorporation en tant que protéine de combinaison de staphylokinase (SAK) est décrite. Une telle protéine de combinaison ne nécessite pas la supplémentation de codons inhabituels pour l'articulation et s'est avérée stable à 37 °C. Les états idéaux de repliement comprenaient l'utilisation d'un opérateur de dénaturation doux sans nécessiter d'autres agents pour empêcher l'agglomération. La protéine de combinaison SAKrhIFN α2b a été filtrée efficacement en utilisant deux étapes de nettoyage et a été séparée en utilisant l'entérokinase en deux parties, à savoir SAK et IFN. Les deux protéines ont été considérées comme organiquement dynamiques, apparaissant comme une fusion appropriée des deux partenaires de combinaison. L'IFN séparé a montré un temps de rétention comparable sur RP-HPLC à celui de l'IFN filtré non marqué déterminé par les bactéries, ainsi qu'une charge subatomique comparable sur le bioanalyseur Agilent 2100, montrant la préparation correcte de l'IFN après le clivage de l'entérokinase. Les niveaux d'articulation de SAK-IFN ont été observés comme deux fois plus élevés que ceux observés avec l'IFN non marqué dans des conditions exploratoires comparatives. Les interférons (IFN) sont des protéines de signalisation cellulaire caractéristiques créées par les cellules de l'ordre sûr de la plupart des vertébrés à la lumière de difficultés, par exemple, les infections, les parasites et les cellules tumorales. Ils appartiennent à la vaste classe de glycoprotéines qui sont délivrées par un large éventail de cellules en raison de la proximité de l'ARN double brin, un marqueur clé de la contamination virale. Après que la capacité clinique de l'IFN ait été reconnue, la FDA a confirmé les médicaments en particulier rhIFNα2a (Roferon An) et IFNα2b (Intron A) pour le traitement des tumeurs nocives et des maladies virales. Le traitement par interféron est utilisé (en association avec la chimiothérapie et la radiothérapie) comme traitement de certaines maladies, notamment le sarcome de Kaposi et l'hépatite chronique B et C (Remington, 1995).