Journal des techniques de chromatographie et de séparation
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Abstrait

Préparation d'un conjugué IgG anti-humain-peroxydase de raifort et son utilisation dans les expériences ELISA et Western Blotting

Ramesh Kumar K, Sneha Xiavor, Swarna Latha, Vijay Kumar et Sukumaran

Les études de notre expérience sont liées à la liaison des enzymes aux anticorps. Cela implique la formation d'une liaison covalente stable entre une enzyme et un anticorps. Nous avons utilisé différentes enzymes pour ces études dont l'action de liaison est modifiée. Nous avons utilisé des enzymes, par exemple la peroxydase de raifort (HRPO), l'uréase ou la phosphatase alcaline. Études d'enzymes et d'anticorps monoclonaux ou polyclonaux spécifiques à l'antigène dans lesquels ni le site de combinaison de l'antigène ni le site actif de l'enzyme ne sont fonctionnellement altérés. L'enzyme la plus couramment utilisée dans la préparation de l'immunoréactif (le conjugué anticorps-enzyme) est le peroxyde de raifort. Cette enzyme est bon marché et peut être fixée à l'immunoréactif par diverses méthodes. De plus, de nombreux substrats chromogènes sont également disponibles. Nos études expérimentales sur la conjugaison de la peroxydase de raifort (HRPO) à l'anticorps (anti-IgG humain) seront réalisées par la méthode d'oxydation au périodate. Nous avons préparé un conjugué anti-IgG humain-HRP dans notre laboratoire. Ce produit sera utilisé pour les expériences ELISA et Western blot et l'IgG purifiée à partir de différents échantillons de sérum humain sera utilisée comme antigène dans les expériences ci-dessus. Cette expérience est réalisée en deux étapes différentes mentionnées comme suit : Préparations du conjugué anti-IgG humaine-peroxydase de raifort, Caractérisation de l'IgG humaine isolée.