Techniques avancées en biologie et médecine
Libre accès

Abstrait

Analyse du polymorphisme des récepteurs aux androgènes humains à l'aide de la technique de déplacement de mobilité hybride à boucle fluorescente

Tomokazu Ishikawa, Shoichi Matsukuma, Mitsuyo Yoshihara, Tatsuo Kurosawa et Yohei Miyagi

Une technique de déplacement de mobilité hybride en boucle fluorescente (LH-MS) a été introduite pour l'analyse des sites polymorphes dans l'exon 1 du gène du récepteur des androgènes humains. Les boucles (CAG)17-31 ou (CTG)17-31 ont été supposées dépasser des brins sens ou antisens des produits de PCR après hybridation avec des sondes LH inverses ou directes, respectivement. Lorsqu'un ensemble d'ADN mâle a été analysé à l'aide de sondes LH marquées au Cy5, une corrélation linéaire unique a été établie entre les longueurs de répétition CAG et les positions des bandes LH fluorescentes sur des gels de polyacrylamide. Ces modèles de bandes à décalage linéaire ont été utilisés pour assembler des marqueurs de taille d'échelle LH des longueurs de répétition CAG. L'analyse de l'ADN féminin a révélé que 87 % des femmes sont hétérozygotes pour les polymorphismes de répétition CAG, ce qui pourrait être informatif pour l'analyse de la clonalité des tumeurs chez les patientes atteintes de cancer. En guise de preuve de principe, l'ADN d'une tumeur colorectale femelle hétérozygote a été examiné à l'aide de la technique LH-MS fluorescente et la perte d'un allèle après traitement avec l'enzyme de restriction sensible à la méthylation HpaII a été clairement démontrée.