Journal des techniques de chromatographie et de séparation
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ISSN: 2157-7064
ISSN: 2157-7064
Pedro AQ, Soares RF, Oppolzer D, Santos FM, Rocha LA, Goncalves AM, Bonifacio MJ, Queiroz JA, Gallardo E et Passarinha LA
Une méthode analytique rapide et simple, basée sur l'utilisation de la RP-HPLC avec détection coulométrique, a été développée et validée pour la quantification de la métanéphrine, un produit O-méthylé dans les dosages enzymatiques de la catéchol-Ométhyltransférase. La séparation isocratique a été réalisée sur une colonne inversée avec une phase mobile composée de 0,1 M de dihydrogénophosphate de sodium, 0,024 M d'acide citrique monohydraté, 0,5 mM d'octyl sulfate de sodium et 9 % d'acétonitrile (% v/v). La méthode s'est avérée linéaire entre 0,25 et 15 nmol/mL avec un coefficient de détermination de 0,9997 pour la métanéphrine. La précision et l'exactitude intra et interjournalières étaient conformes aux critères acceptés dans la validation des méthodes bioanalytiques et la LOD et la LLOQ étaient de 0,25 nmol/mL. L'objectif principal de la méthode développée est la LLOQ plus faible obtenue qui peut avoir des implications importantes dans la recherche en laboratoire pour les déterminations de l'activité COMT, en particulier pour la variante méthionine 108/158 obtenue à partir d'extraits natifs ou recombinants. Un autre avantage majeur de la présente méthode est la durée d'exécution plus courte sur les systèmes chromatographiques automatisés qui permettent l'analyse de plusieurs échantillons en peu de temps. De plus, la métanéphrine était stable dans les échantillons pendant au moins 24 h à température ambiante, pendant au moins 24 h dans l'injecteur du système HPLC et pendant au moins trois cycles de congélation/décongélation. La méthode développée a démontré une sensibilité, une précision, une exactitude, une stabilité et une linéarité supérieures par rapport aux méthodes décrites précédemment. Enfin, une catéchol-O-méthyltransférase