Journal de la science cellulaire et de la thérapie
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Abstrait

Une méthode simple pour l'isolement, la propagation, la caractérisation et la différenciation des cellules souches mésenchymateuses multipotentes dérivées de la moelle osseuse de souris adulte

Jitendra Kumar Chaudhary and Pramod C Rath

Les cellules souches mésenchymateuses (CSM) sont de nature fusiforme, adhérentes, clonogènes, non phagocytaires, fibroblastiques et multipotentes, avec une capacité intrinsèque d'auto-renouvellement et de prolifération. La moelle osseuse est la source la plus riche de CSM pour étudier les processus sous-jacents de prolifération, d'auto-renouvellement et de différenciation multi-lignage. Plusieurs études ont été menées pour améliorer la méthode d'isolement, de propagation, de caractérisation et de différenciation des cellules souches mésenchymateuses à partir de la moelle osseuse de souris, mais aucune n'est largement acceptable. En raison de l'indisponibilité d'une méthode universellement acceptable de culture des CSM, des efforts continus sont déployés dans cette direction. Nous rapportons ici une méthode simple avec quelques modifications subtiles visant à améliorer la méthode globale d'isolement, de culture, de propagation et de différenciation des CSM in vitro. En suivant ce protocole, nous avons isolé des CSM avec une morphologie fusiforme typique comme le montre la microscopie électronique à balayage. Ces cellules ont également montré l'expression de marqueurs spécifiques des CSM, CD29 (98,94 % ± 0,67 %), CD44 (84,27 % ± 7,77 %), Sca-1 (92,70 % ± 3,81 %) avec une expression négligeable de marqueurs spécifiques des CSH tels que CD45 (0,40 % ± 0,10 %), CD34 (0,15 % ± 0,05 %) et CD11b (0,45 % ± 0,15 %). On a également constaté que les CSM se différenciaient en lignées mésodermiques telles que les adipocytes, les ostéocytes et les chondrocytes ainsi qu'en cellules de type neuronal ectodermique. De plus, les CSM ont montré une expression basale différentielle de facteurs de transcription associés à la pluripotence tels que Oct4, Nanog, Sox2 et Myc. Sur la base des résultats ci-dessus, nous proposons un protocole simple qui peut être utilisé pour isoler, cultiver, propager et caractériser les MSC multipotentes de la moelle osseuse de souris à des fins expérimentales et applicatives.