Journal des techniques de chromatographie et de séparation
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Abstrait

Une technique rapide d'isolement des peptides végétaux basée sur leur polarité en utilisant la chromatographie flash BIOTAGE Isolera

Ehuie Micael Bedikou, Rajan Logesh, Sébastien Lamine Niamke, Palaniswamy Dhanabal

Plusieurs années d'expérience dans la réalisation de chromatographie sur colonne ont été condensées en directives simples utiles pour traduire les résultats de la chromatographie en couche mince (CCM) en chromatographie flash isocratique ou à gradient. La présente étude décrit l'utilisation d'un tel protocole avec une cartouche de silice Biotage SNAP KP-Sil 10 g (21 mm × 55 mm, granulométrie 50 μm), pour purifier, en une seule étape, quatre (4) peptides à partir d'extraits de protéines brutes de graines germées d'Amaranthus hybridus. Le meilleur système de solvant utilisé était une combinaison de n-hexane (solvant non polaire B de 5 % à 0 % de concentration finale) et un mélange de solvants polaires (solvant A) composé d'acétonitrile, de n-butanol, d'acide acétique glacial et d'eau dans un rapport de 0,9:2:1:1, respectivement. L'élution a été effectuée en phase normale avec un gradient linéaire. La procédure de chromatographie flash a duré au maximum vingt-cinq minutes (25 min) et moins d'un litre (750 ml) de solvants au total a été utilisé. Les peptides purifiés nommés AhPA, AhPB, AhPC et AhPE ont montré une homogénéité apparente sur les plaques CCM et des rendements de purification d'environ 11,15 %, 10,38 %, 14,50 % et 17,25 %, respectivement. Cette technique innovante offre une alternative efficace aux chercheurs en matière de purification des peptides et participe à la réduction du gaspillage de solvants, de gels, de temps et donc d'argent.