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Abstrait

Une nouvelle stratégie pour l'identification des antigènes reconnus par les cellules T cytotoxiques bovines restreintes au CMH de classe I dans une infection protozoaire en utilisant la vaccinologie inverse

Simon P Graham, Yoshikazu Honda, Roger Pellé, Duncan M Mwangi, E Jane Glew, Etienne P de Villiers, Trushar Shah, Richard Bishop, Pierre van der Bruggen, Vishvanath Nene and Evans LN Taracha

Contexte : Il a été démontré précédemment que l'immunité contre le parasite protozoaire bovin Theileria parva est médiée par la lyse des cellules infectées par le parasite par des lymphocytes T cytotoxiques CD8+ restreints au CMH de classe I. On suppose que l'identification des antigènes schizontes cibles des CTL facilitera le développement d'un vaccin sous-unitaire. Nous avons exploité la disponibilité des données de séquence génomique complète et des outils bioinformatiques pour identifier les gènes codant des protéines sécrétées ou ancrées à la membrane qui peuvent être traitées et présentées par les molécules du CMH de classe I des cellules infectées aux CTL. Résultats : Sur les 986 cadres de lecture ouverts (ORF) prédits codés par le chromosome 1 du génome de T. parva, 55 ont été sélectionnés sur la base de la présence d'un peptide signal et/ou d'un domaine d'hélice transmembranaire. Trente-six ORF sélectionnés ont été clonés avec succès dans un vecteur d'expression eucaryote, transfectés de manière transitoire dans des fibroblastes cutanés bovins immortalisés et criblés in vitro à l'aide de CTL spécifiques de T. parva. La reconnaissance des produits géniques par CTL a été évaluée à l'aide d'un test ELISpot IFN-γ. Un ORF de 525 paires de bases codant pour une protéine de 174 acides aminés, appelée Tp2, a été identifié par CTL spécifique de T. parva à partir de 4 animaux. Ces CTL ont reconnu et lysé les fibroblastes cutanés transfectés par Tp2 et ont reconnu 4 épitopes distincts. De manière significative, des réponses des cellules T CD8+ spécifiques de Tp2 ont été observées pendant la réponse immunitaire protectrice contre la provocation par les sporozoïtes. Conclusion : L'identification d'un antigène contenant plusieurs épitopes CTL et son immunodominance apparente pendant une réponse antiparasitaire protectrice font de Tp2 un candidat intéressant pour l'évaluation de son potentiel vaccinal.