Journal d'ophtalmologie clinique et expérimentale
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Abstrait

Une méthode de double coloration pour distinguer les vaisseaux rétiniens dans le modèle de rétinopathie induite par l'oxygène (OIR)

Ling Xu, Ping Hu, Ye Zhang, Jinyi Long, Xue Wu, Yuhong Ye, Ning Cui, Fei Sun, Xinmin Lu, Jikui Shen, Da Long

Objectif : L'objectif de cette étude était d'améliorer une méthode permettant de gagner du temps, de réduire les coûts et de réduire la main-d'œuvre pour distinguer les vaisseaux structurels rétiniens, les zones de néovascularisation (NV) et de non-perfusion (NP) chez les souris atteintes de rétinopathie induite par l'oxygène (OIR).

Méthodes : Les souris C57BL/6J ont été exposées à des conditions hyperoxiques (75 % ± 2 % O ₂ ) du jour postnatal 7 (P7) au jour P12, puis replacées à l'air ambiant pour provoquer une néovascularisation rétinienne (NV) maximale. Après l'isolement des rétines au jour P17, les montages rétiniens entiers ont été successivement colorés avec la lectine de Griffonia Simplicifolia (GSL) IB4-594 et la GSL IB4-FITC en utilisant des méthodes de coloration contrôlant le temps et la concentration. Cette méthode améliorée n'utilisait que deux milieux de coloration et aucun autre milieu de blocage n'était requis. Les images ont été acquises par microscopie à fluorescence et fusionnées par Adobe Photoshop. La zone de néovascularisation rétinienne et la zone de non-perfusion ont été mesurées par Image-Pro Plus.

Résultats : La coloration avec la concentration de GSL IB4-594 à 1:100 pendant 45 minutes a permis de colorer presque complètement toutes les touffes néovasculaires, ce qui a permis d'évaluer l'état fiable et cohérent de la néovascularisation rétinienne. Parallèlement, les montages rétiniens OIR entiers ont été colorés avec la concentration de GSL IB4-FITC à 1:100 pendant la nuit, suivie d'une coloration au GSL IB4-594, ce qui a permis une identification et une quantification faciles des zones de non-perfusion rétinienne, des vaisseaux structurels et des touffes néovasculaires chez les souris OIR.

Conclusion : L'utilisation d'une double coloration rétinienne reproductible et quantifiable pour évaluer le NV et le NP dans le modèle OIR démontre l'importance d'une méthode de coloration appropriée qui peut facilement calculer le rapport entre le NV et le NP. D'autres résultats tels que l'évaluation de l'efficacité anti-angiogénique des peptides bispécifiques pour l'anti-angiogénèse obtenus à l'aide de cette méthode suggèrent une valeur clinique et scientifique accrue du fait que le rapport entre le NV et le NP peut être facilement identifié en utilisant la double coloration rétinienne.