Journal des techniques de chromatographie et de séparation
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Abstrait

Analyse quantitative de la 25-OH vitamine D par extraction liquide assistée et chromatographie liquide - spectrométrie de masse

Eduard Rogatsky, Shaynah Browne, Min Cai, Harsha Jayatillake et Daniel Stein

Nous présentons une méthode LC/MS à faible volume d'échantillon pour l'analyse de la vitamine D 25OH. La méthode ne nécessite que 40 μl de sérum, est entièrement automatisable, rapide et sensible. La méthode a été mise en œuvre avec succès pour l'analyse clinique des nourrissons pour une carence en vitamine D. La méthode de 6 min a une plage de sensibilité de 2 à 100 ng/ml. Une méthode de 3 min a été validée dans la plage de 5 à 100 ng/ml. Une analyse rapide, un faible volume d'échantillon et une sensibilité élevée ont été obtenus en combinant la préparation d'échantillons par extraction liquide supportée, la chromatographie UHPLC et la colonne chromatographique à noyau fusionné pour la séparation, et la spectrométrie de masse hautement sensible pour la détection. Nous soulignons l'importance de la qualité de la préparation des échantillons pour une analyse LC/MS robuste. En utilisant une préparation d'échantillons basée sur le LES, nous avons utilisé avec succès seulement 40 μl de sérum tout en obtenant une LLOQ de 2 ng/ml. Nous avons constaté à partir d'échantillons analysés que les nourrissons âgés de 3 à 12 mois n'étaient pas carencés en vitamine D, par rapport aux adultes. Le niveau moyen de 25(OH)D3 chez les nourrissons était de 57,3 contre 38,0 ng/ml chez les adultes dans une population de patients du Bronx, à New York.